本發(fā)明公開(kāi)一種特殊修飾的核苷酸及其在高通量測(cè)序方面的應(yīng)用，該核苷酸的熒光標(biāo)記基團(tuán)與核苷酸母體是通過(guò)含鄰二醇鍵的連接臂連接，通過(guò)強(qiáng)氧化劑氧化鄰二醇羥基，使得鄰碳的單鍵斷開(kāi)，簡(jiǎn)單有效地實(shí)現(xiàn)熒光基團(tuán)的化學(xué)切割，對(duì)同一待測(cè)序列模板進(jìn)行兩組或兩組以上的測(cè)序反應(yīng)，每次測(cè)序由兩對(duì)不同熒光標(biāo)記的兩種核苷酸dNTPs循環(huán)組成，按照每種核苷酸在一個(gè)循環(huán)中只使用一次的方式，每進(jìn)行一次測(cè)序反應(yīng)得到由核苷酸片段構(gòu)成一個(gè)編碼，反應(yīng)后得到由一組若干編碼構(gòu)成的核酸序列信息；當(dāng)該組測(cè)序反應(yīng)完成后，進(jìn)行第二組測(cè)序反應(yīng)，得到第二組測(cè)序反應(yīng)排列的若干編碼信息；并結(jié)合測(cè)序的順序來(lái)解碼兩組編碼信息，組裝出待測(cè)核酸片段的具體堿基序列。