含反義堿基的探針法實時熒光PCR,其特征是所選的TaqMan及MGB探針的中部序列引入1~2個或以上的反義修飾的2’-O-Methyl堿基,2’-F-RNA堿基;其關鍵是熒光TaqMan/MGB探針5’端熒光基團標記的正常堿基序列仍能被Taq酶的外切酶活性水解產生熒光,探針因中部的反義堿基而失去了作為PCR擴增模板作用,引物-探針聚合因不能延伸而不能擴增,結合中部同序引物,單獨礦物油密閉,消除指數(shù)非特異性反應。
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