本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，為解決目前蛋白的快速實(shí)時(shí)檢測(cè)中ELISA等檢測(cè)方法復(fù)雜耗時(shí)費(fèi)試劑的缺點(diǎn)、電化學(xué)檢測(cè)方法的非特異性吸附和界面修飾等缺點(diǎn)，本發(fā)明提出了一種蛋白實(shí)時(shí)定量檢測(cè)方法，將待測(cè)蛋白樣本、修飾了待測(cè)蛋白識(shí)別小分子的親和素或鏈霉親合素、調(diào)節(jié)探針、擴(kuò)增模板、切口酶、DNA聚合酶、緩沖液、dNTPs、氯化鎂、SYBR?Green?I?熒光染料制成混合溶液，在等溫條件下進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，將待測(cè)蛋白濃度與等溫?cái)U(kuò)增曲線的出峰時(shí)間之間建立定量關(guān)系，實(shí)現(xiàn)蛋白的實(shí)時(shí)定量檢測(cè)。本方法具有簡(jiǎn)單、特異性高、通用性強(qiáng)和可以實(shí)時(shí)定量檢測(cè)等優(yōu)勢(shì)，其檢測(cè)限能達(dá)到亞納摩爾級(jí)，可以滿足一般的蛋白檢測(cè)要求。