本發(fā)明屬于分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及磷酸化蛋白檢測，尤其涉及一種基于Zr?MOF納米酶的磷酸化蛋白檢測和區(qū)分的方法。磷酸化蛋白質(zhì)可以抑制3,3’,5,5’?四甲基聯(lián)苯胺（TMB）的顯色而非磷酸化蛋白促進(jìn)或者無影響TMB的顯色，本發(fā)明首先配制磷酸化狀態(tài)不同的蛋白質(zhì)溶液、Zr?MOF納米酶和醋酸緩沖液的混合溶液，再依次加入TMB和H₂O₂，待顯色反應(yīng)完成后，依據(jù)溶液驗(yàn)收差異即可區(qū)別二類蛋白。本發(fā)明還公開了基于Zr?MOF納米酶的α?酪蛋白定量檢測方法，其可檢測濃度范圍為0.17～5μg/mL，檢測限低至0.16μg/mL；其他磷酸化蛋白質(zhì)亦同理。本發(fā)明不僅可以定性區(qū)分磷酸化蛋白質(zhì)和非磷酸化蛋白質(zhì)，還可以定量檢測磷酸化蛋白質(zhì)，成本低、靈敏度高、重復(fù)性好、檢測速度快，可用于食品、醫(yī)學(xué)等諸多領(lǐng)域。