本發(fā)明公開一種納米氧化銅為催化劑的流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光測(cè)定膽固醇的方法，包括如下步驟：將膽固醇、膽固醇氧化酶和磷酸鹽緩沖溶液混合溫浴后成反應(yīng)液，將反應(yīng)液稀釋后，經(jīng)蠕動(dòng)泵運(yùn)輸進(jìn)入混合器中與納米氧化銅膠體溶液混合，而后與魯米諾溶液混合，三者混合后進(jìn)入流動(dòng)池反應(yīng)，產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度經(jīng)光電倍增管檢測(cè)以測(cè)定膽固醇。利用膽固醇氧化酶催化膽固醇氧化產(chǎn)生過氧化氫，結(jié)合流動(dòng)注射技術(shù)，增強(qiáng)膽固醇測(cè)定中的化學(xué)發(fā)光信號(hào)，增強(qiáng)倍數(shù)約為600，利用膽固醇-膽固醇氧化酶-魯米諾-納米氧化銅流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法對(duì)膽固醇含量進(jìn)行測(cè)定，線性范圍為0.625~12.5umol/L。可應(yīng)用于食品中膽固醇含量測(cè)定以及血清中游離膽固醇與總膽固醇的測(cè)定。