一種基于點(diǎn)擊化學(xué)的測序接頭、雙條形碼測序文庫及其構(gòu)建方法，該測序接頭包括：日期片段，包括5’端的與正向引物部分或全部序列一致的序列、中間的日期條形碼序列以及3’末端的點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)基團(tuán)；樣本片段頂鏈，包括5’末端的點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)基團(tuán)、中間的樣本條形碼序列以及3’端的與反向引物部分或全部序列一致的序列；樣本片段底鏈，包括5’末端的磷酸化修飾、中間的樣本條形碼序列；其中樣本片段底鏈分別與日期片段和樣本片段頂鏈部分雜交；雜交后日期片段的點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)基團(tuán)與樣本片段頂鏈的點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)基團(tuán)位置接近且能發(fā)生點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)而偶聯(lián)?？梢钥焖?、高效地實(shí)現(xiàn)雙條形碼測序文庫構(gòu)建，通過測序推斷出核酸文庫構(gòu)建的日期，實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確的樣本溯源。