本發(fā)明公開(kāi)了一種數(shù)字化單分子電化學(xué)檢測(cè)堿性磷酸酶的方法。單個(gè)堿性磷酸酶（ALP）催化其底物對(duì)氨基磷酸酚（p?APP）產(chǎn)生還原性的對(duì)氨基苯酚（p?AP），p?AP可立即將Ag+還原成Ag0沉積到微電極表面，最后通過(guò)金屬溶出伏安法得到電信號(hào)。本發(fā)明利用軟光刻技術(shù)構(gòu)建了彼此獨(dú)立的納米金微電極陣列，用于數(shù)字化分析的高通量平行實(shí)驗(yàn)。通過(guò)稀釋酶濃度和控制反應(yīng)液體積，保證每個(gè)微電極中至多含有單個(gè)酶分子，從而實(shí)現(xiàn)堿性磷酸酶的單分子檢測(cè)。通過(guò)數(shù)字化分析的結(jié)合，ALP的檢出限從50?aM降到1?aM，有效地提高了方法的靈敏性和可靠性，并成功用于肝癌細(xì)胞這一復(fù)雜體系中ALP的檢測(cè)。該方法在探究分子的物理化學(xué)性質(zhì)、單個(gè)生物分子檢測(cè)及單細(xì)胞分析中有廣泛的應(yīng)用前景。