本發(fā)明涉及一種N-磷酸化肽富集方法：經(jīng)過β-消除去除肽段樣品中O-磷酸化肽干擾，隨后利用磁性介孔二氧化鈦復合納米材料富集樣品中N-磷酸化修飾肽段。對于絲氨酸和蘇氨酸的O-磷酸化修飾，通過堿性條件下的β-消除方法將其去除，形成穩(wěn)定的脫氫丙氨酸和β-甲基脫氫丙氨酸。通過溶劑法合成四氧化三鐵磁性納米材料，溶膠凝膠法在其表面包覆二氧化鈦，經(jīng)過水熱法擴孔得到磁性介孔二氧化鈦納米復合材料。該磁性介孔二氧化鈦納米復合材料能夠在弱酸緩沖體系下的條件下對N-磷酸化肽進行特異性富集。這種β-消除結(jié)合特異性富集的方法用于樣品中的N-磷酸化肽富集。