本發(fā)明屬于酶固定化的納米功能材料領(lǐng)域，具體涉及一種中空納米纖維內(nèi)部固定化生物酶的制備方法。將高分子聚合物溶于混合有機(jī)溶劑中，充分溶解攪拌均勻形成的透明溶液作為同軸靜電紡絲的外殼紡絲液；將低分子量的多元醇或低聚合度的聚乙二醇溶于純水或磷酸鹽緩沖液中，添加多巴胺和生物酶，充分溶解混合均勻形成的均質(zhì)溶液作為同軸靜電紡絲的內(nèi)芯紡絲液；利用兩臺(tái)微量注射泵分別控制外殼紡絲液和內(nèi)芯紡絲液的流速，施加電壓進(jìn)行同軸靜電紡絲，在接受端收集納米纖維。在同軸靜電紡絲時(shí)和后處理過(guò)程中，多巴胺自發(fā)聚合生成聚多巴胺的同時(shí)，聚多巴胺可以原位共價(jià)交聯(lián)固定化多種生物酶，反應(yīng)條件溫和，方法簡(jiǎn)便實(shí)用，降低了蛋白泄露率。