本發(fā)明屬分子生物學和醫(yī)學領(lǐng)域，涉及一種檢測肝組織中HBV?DNA與cccDNA的原位雜交試劑盒，尤其是一種在慢性乙型肝炎患者肝活檢組織切片中HBV?DNA與cccDNA?(共價閉合環(huán)狀DNA)的原位雜交檢測試劑盒及檢測方法，所述試劑盒包括靶向HBV負鏈DNA與cccDNA特異性區(qū)域互補探針及半抗原偶聯(lián)的信號擴增寡核苷酸，其中，在與酶偶聯(lián)的半抗原結(jié)合蛋白共孵育后，通過化學顯色方法獲得HBV?DNA，cccDNA的組織內(nèi)定位。本發(fā)明的檢測試劑盒適用于慢性乙型肝炎患者肝內(nèi)病毒學水平的評價與抗病毒療效的評價；有助于臨床醫(yī)師獲得對慢乙肝患者肝臟組織學與病毒學更完整的信息，并為慢乙肝個體化治療提供數(shù)據(jù)支持。