本發(fā)明公開了一種基于亞甲基藍(lán)探針同時檢測兩種腫瘤標(biāo)志物的生物傳感器及其構(gòu)建方法和應(yīng)用，生物傳感器包括腫瘤標(biāo)志物適體I和含亞甲基藍(lán)探針的腫瘤標(biāo)志物適體II；其構(gòu)建方法為：將巰基修飾的DNA通過化學(xué)鍵合固定在電極上，在所述DNA上依次通過互補(bǔ)修飾MUC1適體和含亞甲基藍(lán)探針的CEA適體，即得。該生物傳感器可以用來分別檢測兩種不同腫瘤標(biāo)志物，也可以在同一界面上連續(xù)檢測兩種不同腫瘤標(biāo)志物，且具有檢測更簡單、檢出限低、靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。