乙型肝炎病毒siRNA表達(dá)載體的構(gòu)建以及抗病 毒治療應(yīng)用，本發(fā)明屬基因工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明根據(jù)siRNA 的設(shè)計(jì)原則，分別選擇HBV包膜蛋白(MS)編碼區(qū)69nt－87nt， 聚合酶(P)編碼區(qū)708nt－726nt，核心蛋白(C)編碼區(qū)2052nt－ 2070nt的核苷酸序列，設(shè)計(jì)相應(yīng)的siRNA序列，用BLAST軟 件進(jìn)行同源分析證實(shí)為HBV高度保守序列后，化學(xué)合成單鏈 寡核苷酸，體外經(jīng)退火形成雙鏈DNA，與真核表達(dá)載體 pTZU6+1連接，酶切鑒定和序列測(cè)定分析表明成功構(gòu)建了三種 靶向乙型肝炎病毒(HBV)基因序列的siRNA表達(dá)載體。上述表 達(dá)載體通過陽(yáng)離子脂質(zhì)體介導(dǎo)與HBV真核表達(dá)載體pHBV共轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞HepG2后，采用免疫熒光和Abbott實(shí)驗(yàn)均證實(shí)HBV siRNA具有較強(qiáng)抑制病毒復(fù)制和表達(dá)的作用。