本發(fā)明涉及一種無血清無飼養(yǎng)層的胚胎干細胞或多能干細胞培養(yǎng)基及其應用，所述無血清無飼養(yǎng)層的胚胎干細胞或多能干細胞培養(yǎng)基包括基礎培養(yǎng)基和添加劑，所述添加劑包括肝素鈉、哌啶酸、γ?氨基丁酸和鋰離子鹽。其是一種完全無異源(Xeno?free)的培養(yǎng)體系，不會帶來外源污染；培養(yǎng)基中的bFGF濃度可以被顯著地降低，因而使培養(yǎng)基的制備成本顯著降低，同時有效減少了bFGF的聚集現(xiàn)象，穩(wěn)定性提高，使培養(yǎng)的胚胎干細胞或多能干細胞的質量維持穩(wěn)定，能夠長時間維持胚胎干細胞或多能干細胞的未分化狀態(tài)和多能性；另外，哌啶酸、γ?氨基丁酸和鋰離子鹽三種物質在促進胚胎干細胞或多能干細胞的生存、增殖、維持連續(xù)傳代中具有難以預料的協(xié)同增效作用。