本發(fā)明涉及一種血管內(nèi)皮生長因子檢測試劑盒及其使用方法和應(yīng)用。該血管內(nèi)皮生長因子檢測試劑盒包括第一連接物連接的第一抗體片段、第二連接物包被的磁珠和發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的第二抗體片段。該血管內(nèi)皮生長因子檢測試劑盒中用于與血管內(nèi)皮生長因子特異性結(jié)合的第一抗體片段與第二抗體片段中至少一個(gè)為血管內(nèi)皮生長因子抗體的Fab片段，較之傳統(tǒng)的IgG全片段抗體，可有效避免Fc片段的非特異性結(jié)合，因而檢測特異性可顯著提高；使用磁珠可以增大反應(yīng)的靈敏度，并可進(jìn)行獨(dú)立單人份檢測；使用直接化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物進(jìn)行抗體片段標(biāo)記，在檢測時(shí)，無需加入酶促反應(yīng)試劑，因而所需的檢測時(shí)間短，檢測效率高。該檢測試劑盒易于制作，可廣泛推廣使用。