本發(fā)明屬于電化學(xué)免疫傳感領(lǐng)域，公開一種多重定量電化學(xué)免疫傳感器及其構(gòu)建方法，傳感器包括檢測探針，檢測探針表面設(shè)置有：自組裝分子層，與所述檢測探針表面連接；捕捉抗體，與所述自組裝分子層連接，用于捕捉總目標物蛋白所述總目標物蛋白包括磷酸化目標物蛋白和未磷酸化目標物蛋白；功能化電化學(xué)標記物，連接所述磷酸化目標物蛋白，用于在電化學(xué)測量時放大信號。本發(fā)明的多重定量電化學(xué)免疫傳感器能夠在一個樣品溶液中同時捕獲包含磷酸化目標物蛋白和未磷酸化目標物蛋白的總目標物蛋白；再通過功能化電化學(xué)標記物特異性捕獲并定量檢測磷酸化目標物蛋白，從而得到蛋白質(zhì)磷酸化的水平程度。