一種雙酶傳感器及其制備和應用,屬雙酶傳感器和水體的微生物學檢驗的技術領域。該傳感器由玻璃棒基底、納米銦錫氧化物電極、辣根過氧化酶和多元酚氧化酶組成,納米銦錫氧化物電極以薄膜形式依附在玻璃棒基底的表面,多元酚氧化酶和辣根過氧化酶以薄膜形式依次分別依附在納米銦錫氧化物電極的表面。在依附有納米銦錫氧化物電極的玻璃棒基底上,采用3-氨基丙基三乙氧基硅烷分子在納米銦錫氧化物(ITO)電極上的自組裝,通過戊二醛形成席夫堿,將多元酚氧化酶和辣根過氧化酶依次化學鍵合在納米銦錫氧化物電極上,制得雙酶傳感器。以所述的雙酶傳感器為工作電極,采用計時電流法測量流過工作電極的電流實現(xiàn)對水體中大腸桿菌濃度的快速檢測。