本發(fā)明公開(kāi)了一種25羥維生素D3檢測(cè)試劑卡及其制備方法，涉及維生素免疫化學(xué)試驗(yàn)物質(zhì)的制備。本發(fā)明是在檢測(cè)試劑卡內(nèi)檢測(cè)試紙條的樣品墊和吸樣墊之間依次設(shè)置有含有膠體金標(biāo)記的25-羥基維生素D3抗體的膠體金墊，分別包被有25-羥基維生素D3-偶聯(lián)蛋白的T線和抗鼠IgG的C線的NC膜；試劑卡頂面形成對(duì)應(yīng)標(biāo)示T線和標(biāo)示C線位置的觀察窗，對(duì)應(yīng)樣品墊位置形成有稀釋液孔和加樣孔。使用時(shí)結(jié)合帶有25-羥基維生素D3內(nèi)置標(biāo)準(zhǔn)曲線的免疫層析結(jié)果判讀記錄儀，對(duì)檢測(cè)結(jié)果的進(jìn)行定量判定，適合血清、血漿、全血樣本，檢測(cè)簡(jiǎn)便、快速，適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，經(jīng)濟(jì)實(shí)用。