本發(fā)明涉及一種24,25?雙羥基維生素D免疫檢測試劑盒及其應(yīng)用，試劑盒包括：全氟辛酸工作液、生物素工作液、抗體工作液、鏈霉親和素包被的磁顆粒試劑、24,25?(OH)2?VitD校準(zhǔn)品溶液及化學(xué)發(fā)光底物液，所述抗體工作液包含化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗24,25?(OH)2?VitD免疫單抗、未標(biāo)記的抗25?OH?VitD免疫單抗、未標(biāo)記的抗1,25?(OH)2?VitD免疫單抗、未標(biāo)記的抗3?epi?25OH?VitD免疫單抗。本發(fā)明還采用上述試劑盒對24,25?(OH)2?VitD進(jìn)行化學(xué)發(fā)光免疫檢測，結(jié)果準(zhǔn)確。