本發(fā)明涉及了一種桔霉素-蛋白偶聯(lián)抗原的雙交聯(lián)化學(xué)合成法及其抗桔霉素單克隆抗體的制備方法,屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。該方法用桔霉素先與雙交聯(lián)試劑(C2H3O)-(CH2)n-(C2H3O)進(jìn)行反應(yīng),然后與載體進(jìn)行偶聯(lián),反應(yīng)后用甘氨酸進(jìn)行封閉,最后經(jīng)分離純化得到桔霉素載體偶聯(lián)抗原。應(yīng)用雜交瘤細(xì)胞技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞融合和篩選,獲得穩(wěn)定分泌的抗桔霉素單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,通過(guò)制備腹水和純化,獲得抗桔霉素的單克隆抗體。本發(fā)明制備條件溫和、操作簡(jiǎn)且過(guò)程可控,所獲得的抗桔霉素單克隆抗體特異性高、親和力強(qiáng),可用于進(jìn)一步制備桔霉素檢測(cè)的酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒或試紙卡。