本發(fā)明涉及三維DNA納米結構、電化學生物傳感器及其制備方法和應用。所述三維DNA納米結構為六面體結構，且所述六面體結構可通過與不同目標分子相結合而發(fā)生結構轉變并導致電化學信號轉變。所述三維DNA納米結構單元底面四個頂點通過自組裝作用固載在金電極表面。本發(fā)明將該DNA納米結構組裝在電極表面構置了新型電化學生物傳感器，六面體結構的DNA具有高特異性識別目標分子和高穩(wěn)定性的特性，提高了電化學生物傳感器的分析性能；本發(fā)明所構置的電化學生物傳感器可通過替換DNA鏈實現(xiàn)凝血酶、溶菌酶等不同待測物的檢測，應用范圍廣泛。