本發(fā)明涉及一種禽白血病病毒的化學發(fā)光抗原定量檢測試劑盒及檢測方法，屬于免疫檢測領(lǐng)域，該試劑盒包括化學發(fā)光板、標記抗體、過氧化物溶液、校準品、樣品稀釋液和洗滌液，其中，化學發(fā)光板包被有抗p27蛋白的單克隆抗體Ⅰ，標記抗體為異米魯諾標記的抗p27蛋白的單克隆抗體Ⅱ；單克隆抗體Ⅰ和單克隆抗體Ⅱ為配對抗體；校準品是由高純度P27蛋白配制的；過氧化物溶液為含有乙酰氨基酚的過氧化氫溶液；樣品稀釋液為含有馬血清、曲拉通和S9的磷酸鹽緩沖液。本發(fā)明利用高純度P27蛋白和一對配對單克隆抗體制備的禽白血病毒化學發(fā)光抗原定量檢測試劑盒，其敏感性高，特異性性好，穩(wěn)定性強，具有良好的可靠性，為更好地凈化雞群禽白血病奠定了基礎。