本發(fā)明提供一種毛霉型豆豉苦味肽的制備方法及應(yīng)用，制備粉末A、粉末B、粉末C；將粉末C溶于去離子水中，以A相質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.05％三氟乙酸水溶液和B相質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.05％三氟乙酸乙腈溶液為洗脫液，采用半制備型HPLC反相C18柱進(jìn)行梯度洗脫，收集目標(biāo)峰，冷凍干燥，得粉末D；將粉末D溶于去離子水中，以A相質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.05％三氟乙酸水溶液和B相質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.05％三氟乙酸乙腈溶液為洗脫液，采用分析型HPLC反相C18柱進(jìn)行梯度洗脫，收集目標(biāo)峰，冷凍干燥，得苦味肽I。制得的苦味肽I應(yīng)用于食品中，提供食品豆豉苦味，增加食品的鮮味；該苦味肽易于化學(xué)合成，且合成的產(chǎn)品純度高，穩(wěn)定性好，可擴(kuò)寬該苦味肽的應(yīng)用領(lǐng)域。