本發(fā)明屬分析化學(xué)領(lǐng)域,具體涉及一種測定膽堿濃度的方法。本方法以異氰酸酯或異硫氰酸酯對樣品中膽堿進(jìn)行化學(xué)衍生化之后,采用高效液相色譜法測定膽堿衍生物。本方法能排除其他物質(zhì)對膽堿的干擾,采用通用型的液相色譜柱和紫外檢測器即可對膽堿進(jìn)行高效液相色譜測定,線性范圍50-1000ng,最小檢出量10ng。血漿中膽堿回收率91%以上,RSD小于9.5%。本發(fā)明可準(zhǔn)確地用于血漿、尿液、腦脊液、生物組織等生物材料以及保健食品、藥品、飼料、動植物天然提取物中膽堿濃度的定量測定。