本發(fā)明公開了一種基于酶型原電池的電化學傳感器及其制備方法。該電化學傳感器由電池陰極、電池陽極、萬用表和外加電阻串聯組成；所述電池陰極和陽極包括依次排列的基底電極、碳納米材料層、催化劑層(介體層)及酶層；其中，陰極上的碳納米材料層由陽離子功能化的碳納米材料組成，催化劑層由普魯士藍組成，酶層包括氧化酶或氧化酶、惰性蛋白和交聯劑交聯形成的固定化酶；陽極上的碳納米材料層由非功能化的碳納米材料組成，介體層由亞甲基藍、亞甲基綠、聚合亞甲基綠或聚合亞甲基藍組成，酶層包括脫氫酶或脫氫酶、惰性蛋白和交聯劑交聯形成的固定化酶。本發(fā)明中基于原電池的傳感器無需外來供能裝置，燃料分子同時也即被檢測物質，有望發(fā)展成為一種新型便攜式電化學傳感器。