本發(fā)明涉及一種化學(xué)發(fā)光-膠體金免疫層析試紙條的構(gòu)建方法及應(yīng)用，特別涉及一種高靈敏、可定量的化學(xué)發(fā)光-膠體金免疫層析試紙條的構(gòu)建方法及應(yīng)用。所述方法是將化學(xué)發(fā)光和膠體金免疫層析方法相結(jié)合，包括：將膠體金的表面同時(shí)偶聯(lián)上檢測(cè)抗體和酶，形成膠體金-酶-抗體復(fù)合物，再依次將膠體金-酶-抗體復(fù)合物、包被抗體分別噴在樣品結(jié)合墊和膜上，通過(guò)免疫層析反應(yīng)，基于膠體金的顏色深淺實(shí)現(xiàn)定性檢測(cè)，基于酶催化的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的光強(qiáng)度實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)，從而構(gòu)建得到化學(xué)發(fā)光-膠體金免疫層析試紙條；將所述試紙條應(yīng)用于生物大分子和小分子的檢測(cè)。本發(fā)明可同時(shí)實(shí)現(xiàn)定性、定量和高靈敏的檢測(cè)，適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和家庭個(gè)性化診斷。