本發(fā)明公開了蘋果酸在5?甲基及5?羥甲基胞嘧啶核苷分析中的應(yīng)用，所述應(yīng)用是指在用于5?甲基及5?羥甲基胞嘧啶核苷液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析的流動相中添加蘋果酸，蘋果酸的添加濃度為0.06mM。本發(fā)明能夠顯著提高5?甲基及5?羥甲基胞嘧啶核苷的檢測靈敏度，且應(yīng)用方便，只需在流動相中加入適當(dāng)量的蘋果酸，無需改變其他分析條件；運(yùn)用該方法可以對尿液等復(fù)雜生物樣本中的5?甲基及5?羥甲基胞嘧啶核苷進(jìn)行高效定量分析，在代謝組學(xué)、生物化學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)及預(yù)防醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有很好的應(yīng)用推廣價值。