本發(fā)明涉及化學發(fā)光分析領域的一種均相化學發(fā)光檢測方法及其應用。該方法包括如下步驟：步驟S1，將包含化學發(fā)光配對微球中的第一微球及疑似包含待測目標分子的待測物的液相反應物與固相支持物表面接觸反應，其中所述固相支持物表面設置有化學發(fā)光配對微球中對應的第二微球；步驟S2，利用能量或活性化合物激發(fā)化學發(fā)光配對微球中的一種微球生成活性氧，化學發(fā)光配對微球中的另一種微球與其接觸到的活性氧反應產(chǎn)生化學發(fā)光信號；步驟S3，檢測步驟S2中所述化學發(fā)光信號的強度，分析待測物中是否存在待測目標分子和/或待測目標分子的濃度。該方法可同時檢測多個待檢分子，反應速度快，且有效消除均相免疫檢測中的基質(zhì)效應。