本發(fā)明公開了一種硫代羅丹明B內(nèi)酰胺衍生物其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下。該硫代羅丹明B內(nèi)酰胺衍生物的制備方法為,通過以羅丹明B與乙酸乙酯反應(yīng)生成內(nèi)酯化合物,再經(jīng)三氯氧磷氧化得羅丹明B氯化物,該氯化物與氨氣反應(yīng)得氨基羅丹明B化合物,最后經(jīng)與Lawesson′s試劑反應(yīng)制得硫代羅丹明B內(nèi)酰胺衍生物。該類熒光化合物在酸堿性環(huán)境中具有較高的穩(wěn)定性,可作為熒光探針用于細胞及細胞器中pH的測定。