本發(fā)明公開(kāi)了一種基于腔腸素?h的氘代化合物及其制備方法與應(yīng)用，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：其中，R1為苯基或氘代苯基，R2為氫或氘，R3為氫或氘，R4為氫或氘，R5為氫或氘，R6為氫或氘，R1～R6中的至少一個(gè)基團(tuán)為氘代基團(tuán)。本發(fā)明提供的氘代化合物作為生物發(fā)光底物的應(yīng)用，能夠監(jiān)測(cè)螢光素酶在體內(nèi)外的分布情況。在酶水平，細(xì)胞水平和動(dòng)物水平，對(duì)比于腔腸素?h，其氘代物的生物發(fā)光強(qiáng)度優(yōu)于腔腸素?h。同時(shí)本發(fā)明提供的腔腸素?h的氘代化合物的制備方法，該方法簡(jiǎn)單，反應(yīng)步驟經(jīng)典，可操作強(qiáng)，成本低，具有良好的實(shí)用價(jià)值。