本發(fā)明公開了一種靶向抑制維生素K環(huán)氧化物還原酶的小分子化合物的篩選方法及應用，屬于分子細胞生物學和生物化學技術領域。本發(fā)明通過構建維生素K循環(huán)小分子抑制劑篩選體系(即雙報告基因細胞體系)，可以快速對藥物小分子庫進行高通量篩選，得到靶向抑制維生素K循環(huán)的小分子化合物；進一步通過檢測篩選出的小分子化合物對VKOR蛋白活性的抑制作用，可以得到特異性抑制VKOR蛋白活性的小分子化合物。采用該方法，本發(fā)明首次篩選到一些結構不同于香豆素類的衍生物和苯茚二酮類的衍生物的化合物，它們能特異性抑制VKOR蛋白活性，具有開發(fā)為滅鼠藥和抗凝藥物的潛在應用價值，是開發(fā)滅鼠藥和抗凝藥物的先導化合物。