本發(fā)明涉及一種粒徑單分散液相色譜固定相填料及其制備和應用。所述的粒徑單分散液相色譜固定相填料是由粒徑大小為數(shù)微米的聚（甲基丙烯酸丁酯-二乙烯基苯）微球[P(BMA-DVB80)]構成。該聚（甲基丙烯酸丁酯-二乙烯基苯）微球[P(BMA-DVB80)]是以甲基丙烯酸丁酯(BMA)為功能單體、二乙烯基苯(DVB-80)為交聯(lián)劑在乙腈和甲苯構成的溶劑中直接聚合而成。該固定相填料具有制備工藝簡單、微球粒徑單分散性高、微球表面潔凈、化學穩(wěn)定性好、比表面積大和生物相容性強等突出優(yōu)點，用于分離分析有機物、多肽、蛋白質等物質時具有較高的分離效能。