本發(fā)明公開(kāi)了一種疏水蛋白?熒光蛋白融合蛋白及其構(gòu)建與應(yīng)用，其構(gòu)建為：(1)化學(xué)合成改良過(guò)的疏水蛋白mHGFI、熒光蛋白smURFP及HO?1的核苷酸序列；(2)將熒光蛋白基因smURFP的核苷酸序列與HO?1的核苷酸序列連接；再將疏水蛋白基因mHGFI的核苷酸序列和熒光蛋白基因smURFP與HO?1基因的核苷酸序列連接得到融合序列；(3)將融合序列連接到大腸桿菌表達(dá)載體上，得到重組表達(dá)載體；(4)將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)入宿主大腸桿菌中，得到重組大腸桿菌；(5)破菌后，通過(guò)Ni親和層析、離子交換層析、凝膠過(guò)濾層蛋白純化方法得到疏水蛋白?熒光蛋白融合蛋白。本發(fā)明對(duì)從大腸桿菌中純化出的融合蛋白進(jìn)行凝血酶檢測(cè)，與其他檢測(cè)方法相比具有生產(chǎn)成本低、生產(chǎn)效率高、操作簡(jiǎn)便、反應(yīng)迅速、檢測(cè)特異性與靈敏度高的優(yōu)勢(shì)。