本發(fā)明提供了一種集成式免疫層析試紙，所述試紙基于固相化學(xué)發(fā)光體系，所述試紙包括底物墊和層析試紙；其中所述底物包括固態(tài)過氧化物，優(yōu)選地，所述固態(tài)過氧化物為過硼酸鈉。還提供了試紙的制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明試紙采用化學(xué)發(fā)光信號作為層析試紙的讀出方式，可以同時滿足高靈敏度和定量分析的要求；采用了過硼酸鈉作為氧化劑，底物混合物在混合凍干之后仍然保持了強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光活性；采用了冷凍干燥的方法將底物混合物負(fù)載在玻璃纖維上作為底物墊，與層析試紙集成，避開了傳統(tǒng)基于化學(xué)發(fā)光信號讀出系統(tǒng)需要額外分別儲存化學(xué)發(fā)光底物，使用前進(jìn)行混合的步驟，簡化了操作步驟；制備方法簡單，易于推廣，有很好的應(yīng)用前景。