本發(fā)明公開了一種石墨紙基普魯士藍電化學傳感器及其制備方法和應用，該石墨紙基普魯士藍電化學傳感器包括石墨紙，石墨紙的表面形成有普魯士藍膜，普魯士藍膜上沉積有金納米層。該制備方法包括：1)將石墨紙的表面進行預處理以形成毛面；2)將石墨紙置于混合溶液中進行電化學處理以在石墨紙的表面形成普魯士藍膜；3)在形成有普魯士藍膜的石墨紙的表面沉積金納米層以制得石墨紙基普魯士藍電化學傳感器；其中，混合溶液含有三價鐵鹽和鐵氰化物。該石墨紙基普魯士藍電化學傳感器具有優(yōu)異的靈敏度、抗干擾能力、選擇性和穩(wěn)定性，進而使得其能夠應用于過氧化氫或煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的高效檢測，同時該制備方法具有操作簡單、成本低廉的優(yōu)點。