本發(fā)明是一種均相酶測定技術的免疫學檢測的方法極其試劑，用于測定樣品中25?羥基維生素D3（25?hydroxyvitamin?D3,25OHD3）的含量。該方法采用抗25OHD3特異性抗體、酶?25OHD3復合物，利用酶?25OHD3復合物與抗25OHD3特異性抗體免疫學反應，形成抗原抗體復合物后，酶?25OHD3復合物活性受到抑制,通過測定反應體系中酶活性的變化，從而得到結合的酶標記物數量，從而得到待測樣品中25OHD3的含量。該方法的優(yōu)點是可以像普通生物化學酶方法一樣，實現(xiàn)免疫學測定，從而在全自動生化分析儀上同時測定多個樣品，符合臨床檢測要求快速、大批量和經濟的特點，有利于推廣和應用。