本發(fā)明公開了一種牛支原體抗體光激化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒及其檢測方法，該試劑盒包括牛支原體P30蛋白單克隆抗體、山羊抗小鼠IgG偶聯(lián)的受體微珠、帶有His標(biāo)簽的牛支原體P30蛋白抗原和鎳螯合的供體磁珠。本發(fā)明采用基因工程技術(shù)制備了牛支原體P30外膜蛋白，采用PEG1500細(xì)胞融合技術(shù)制備了牛支原體P30蛋白單克隆抗體，將純化后的重組P30蛋白作為抗原和制備的單克隆抗體間的相互作用，通過樣品中抗體與單克隆抗體競爭性結(jié)合重組P30蛋白，建立競爭性牛支原體抗體AlphaLISA的檢測方法。該檢測方法檢測時(shí)間短，特異性好，靈敏度高，不需洗滌，操作簡便，檢測成本低。