本發(fā)明公開提供了一種人體血清葉酸的測定方法，屬于醫(yī)學(xué)檢測領(lǐng)域。該方法是將人體血清經(jīng)高效液相色譜分離后用化學(xué)發(fā)光檢測器檢測實(shí)現(xiàn)的，包括的步驟有：標(biāo)準(zhǔn)品制備、標(biāo)本處理、色譜條件設(shè)定、化學(xué)發(fā)光體系試劑制備、檢測。本發(fā)明將具有高效分離特性的高效液相色譜分析法與靈敏度高、線性范圍寬的化學(xué)發(fā)光法聯(lián)用，實(shí)現(xiàn)了人體血清葉酸高靈敏度、高準(zhǔn)確性、強(qiáng)穩(wěn)定性的測定；建立Fe2+-H2O2-luminol-NaOH化學(xué)發(fā)光體系用于快速精確地測量人體血清葉酸。