本發(fā)明公開了基于外周血的NK細(xì)胞體外培養(yǎng)方法，包括以下步驟：取用外周血和B958細(xì)胞備用，利用外周血經(jīng)分離液處理后獲得PBMC細(xì)胞，利用B958細(xì)胞獲得含有EB病毒顆粒的EBV上清液，將所得PBMC細(xì)胞利用EBV上清液轉(zhuǎn)化為永生化EBV?LCL細(xì)胞，利用所得PBMC細(xì)胞經(jīng)磁珠分選分離獲得純化后的NK細(xì)胞，將NK細(xì)胞經(jīng)原代培養(yǎng)后置于無血清培養(yǎng)基中進(jìn)行傳代培養(yǎng)，獲得增殖后的NK細(xì)胞。本發(fā)明的有益效果是：利用B958細(xì)胞制備含有EB病毒顆粒的EBV上清液，獲得永生化EBV?LCL細(xì)胞，使得NK細(xì)胞具有無限增殖能力，同時具有較強(qiáng)的殺傷腫瘤細(xì)胞的能力，NK細(xì)胞的擴(kuò)增采用無血清培養(yǎng)基，避免血清源性污染以及避免血清批次間的質(zhì)量變動，提高細(xì)胞培養(yǎng)和實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。