本發(fā)明屬于顯微光譜成像技術領域,涉及一種差動共焦拉曼光譜測試方法。該方法融合差動共焦檢測方法和拉曼光譜檢測方法技術特點,構成一種可實現(xiàn)樣品微區(qū)光譜檢測的測試方法,通過差動共焦技術精確捕捉激發(fā)光束聚焦焦點位置,探測對應位置的拉曼光譜,同時采用設計的光瞳濾波器,銳化差動共焦拉曼光譜系統(tǒng)的愛里斑主瓣,改善其微區(qū)拉曼光譜探測能力,精確獲取包括微區(qū)樣品光譜信息和位置信息的微區(qū)空間光譜信息。本發(fā)明顯著提高了共焦拉曼光譜顯微鏡的微區(qū)光譜探測能力;具有絕對跟蹤零點和雙極性跟蹤特性,實現(xiàn)幾何尺度絕對測量;可廣泛應用于生物醫(yī)學、生命科學、生物物理、生物化學、材料、工業(yè)精密檢測等技術領域,進行微區(qū)幾何位置和光譜特性的高精度檢測,具有極其重要的應用前景。