本發(fā)明公開(kāi)了一種DNA合成測(cè)序方法和測(cè)序系統(tǒng)，所述方法包括：通過(guò)水溶性雙功能連接單元將引物P1連接于基體表面；在基體表面加入含待測(cè)DNA模板的溶液，然后進(jìn)行等溫表面放大反應(yīng)；再將引物Pe加入基體表面，然后在基體表面加入四種堿基的熒光標(biāo)記可逆終止劑的延伸反應(yīng)溶液，進(jìn)行延伸反應(yīng)；然后對(duì)延伸后的DNA雙鏈進(jìn)行成像之后，加入相應(yīng)的化學(xué)試劑，使熒光標(biāo)記可逆終止劑的連接單元斷裂。重復(fù)DNA鏈延伸和斷裂步驟，完成多次循環(huán)測(cè)序，即得待測(cè)DNA模板核苷酸的堿基序列。本發(fā)明測(cè)序方法可用于DNA高通量合成測(cè)序，在所述測(cè)序條件下實(shí)驗(yàn)結(jié)果其讀長(zhǎng)至少為73堿基；如果雙端測(cè)序，其讀長(zhǎng)至少為146，準(zhǔn)確率至少為99.98％。