本發(fā)明涉及一種基于相均衡倍頻調制原理的時間分辨熒光檢測方法，通過基頻信號調制激發(fā)光源作用于待測標的物上，觸發(fā)熒光，使熒光成周期性增強與衰減，再通過二倍頻方波信號，控制采樣周期，將熒光上升周期和衰減周期都一分為二，分別獨立采樣后計算兩部分采樣差值并相加得到熒光信號的強度表征值，得到待測標的物的濃度值。本發(fā)明的方法不僅同樣可以消除樣品中底物的熒光干擾，還可以消除環(huán)境背景光、空間電磁波工頻干擾等信號，提升檢測樣品熒光測量信號強度，具備常規(guī)時間分辨熒光方法無法完成的優(yōu)勢，可應用于生物、化學、醫(yī)學等領域標的物的熒光強度檢測。