本發(fā)明涉及一種檢測(cè)外周血抗原特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的新方法,包括構(gòu)建和制備MHC I類分子的突變體蛋白,通過(guò)體外孵育得到MHC I類分子突變體-肽復(fù)合物,將所述復(fù)合物與光交聯(lián)劑化學(xué)交聯(lián),使已經(jīng)交聯(lián)了光交聯(lián)劑的復(fù)合物與樣品中所要檢測(cè)的抗原特異性CTLs相互結(jié)合,在溫和條件下進(jìn)行光交聯(lián)而將MHC I類分子突變體-肽復(fù)合物不可逆地共價(jià)結(jié)合在CTL表面的TCR上,隨后用免疫熒光檢測(cè)抗原特異性CTL。本發(fā)明還涉及使用所述方法的試劑盒及其應(yīng)用。