本文公開了利用熒光染料的發(fā)光強(qiáng)度的溫度依賴性對(duì)核酸進(jìn)行測(cè)序的改進(jìn)的方法和系統(tǒng)。在每個(gè)測(cè)序循環(huán)期間調(diào)節(jié)測(cè)序反應(yīng)的溫度，并且使用這些熒光染料在不同溫度下或在不同溫度范圍內(nèi)達(dá)到或超過閾值的光的發(fā)射或不發(fā)射來檢測(cè)摻入的dNTP的熒光標(biāo)記物，從而對(duì)核酸進(jìn)行測(cè)序。所公開的方法使得能夠以合理數(shù)目的化學(xué)步驟確定在任何給定位點(diǎn)處摻入的dNTP，而無需現(xiàn)有技術(shù)系統(tǒng)所必需的復(fù)雜光學(xué)器件。