本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，公開(kāi)了一種完全均相測(cè)定胰島素的檢測(cè)試劑盒及其方法。本發(fā)明基于雙抗體夾心技術(shù)，吖啶酯標(biāo)記抗人胰島素抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗人胰島素抗體分別結(jié)合在胰島素分子的抗原決定簇上，形成抗體?抗原?抗體的免疫復(fù)合物，加入觸發(fā)劑后，辣根過(guò)氧化物酶氧化觸發(fā)劑產(chǎn)生羥自由基，羥自由基的半衰期非常短，且在抗氧化劑的作用下，能保證羥自由基在抗體?抗原?抗體的免疫復(fù)合物分子內(nèi)部傳遞，吖啶酯在羥自由基的作用下，產(chǎn)生光信號(hào)，其光信號(hào)與胰島素含量成正相關(guān)。本發(fā)明試劑盒能夠?qū)崿F(xiàn)完全均相化學(xué)發(fā)光檢測(cè)胰島素，不需要固定抗體，也不需要洗滌過(guò)程，具有穩(wěn)定性好，檢測(cè)快速便捷，靈敏度高，特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。