本發(fā)明提供了一種L?谷氨酰胺和D?谷氨酰胺的分離檢測(cè)方法及應(yīng)用，涉及分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。檢測(cè)方法采用高效液相色譜法，色譜條件包括：采用手性色譜柱；以高氯酸水溶液?甲醇為流動(dòng)相；等度洗脫。本發(fā)明提供的L?谷氨酰胺和D?谷氨酰胺的分離檢測(cè)方法，通過對(duì)流動(dòng)相、色譜柱的優(yōu)化設(shè)計(jì)，使L?谷氨酰胺和D?谷氨酰胺達(dá)到有效分離，且分離度良好，不受其他雜質(zhì)干擾。經(jīng)過系統(tǒng)方法學(xué)驗(yàn)證，專屬性強(qiáng)、靈敏度高，可用于甘氨酰?L?谷氨酰胺原料藥或其制劑中D?谷氨酰胺的分離檢測(cè)，提高了氨基酸注射液的安全性和有效性。