本發(fā)明屬于分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，提供了艾塞那肽的前處理及其得到的His氨基酸洗脫液中異構(gòu)體的檢測方法。本發(fā)明將待測艾塞那肽進(jìn)行水解和氨基酸分離，收集His氨基酸洗脫液；利用高效液相色譜對所述His氨基酸洗脫液進(jìn)行手性分析；所述高效液相色譜的條件包括：色譜柱：CROWNPAKCR(+)150*4.0mm 5μm；流動(dòng)相：pH值為1.0的高氯酸水溶液。本發(fā)明先將艾塞那肽進(jìn)行水解，得到氨基酸混合物，再利用高效液相色譜分離將氨基酸混合物中的His氨基酸進(jìn)行分離，得到His氨基酸洗脫液，前處理方法操作簡單；再通過控制色譜柱類型和流動(dòng)相組成，實(shí)現(xiàn)了His氨基酸中不同異構(gòu)體的分離和測定，且數(shù)據(jù)重現(xiàn)性好。